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红龙扑克poker奥维森科技:转录组学测序送样指南

时间:2023-09-30 17:06:10 点击次数:

  转录组测序(RNA-seq)是基于第二代高通量测序时间举行cDNA测序,全体敏捷地获取某一物种特定器官或构造正在某一状况下的简直扫数转录本。转录组测序依然是一项很成熟的时间,但由于样品计算手腕的舛讹或者运输要求的不对理而导致RNA降解事项却时有产生,让许多幼伙伴颇为费心。本日,幼编就纠合既往经历,为专家送上转录组测序送样指南,生气对专家有所帮帮!

  代表性:遵循实践方针,拣选相宜取样计划,这将有利于实践结果确切反响样本的性质音信。

  正确性:构造取材部位要正确,精确识别所要推敲的构造部位,剔除与推敲无合的构造部位,正在要求应承的条件下,争取做到实践组与比照组样本正在取材时候、部位、解决要求等方面尽能够维系同等。

  实时性:鉴于RNA构造的特别性,极易降解,且易受到RNase的影响,以是正在样本收集、储存、运输和造备的进程中应尽能够地正在楷模操作的同时维系疾速,最时势限的缩短从样本收集到实践的时候。

  无污染性:所用实践试剂及器皿需经去RNA酶解决,解决样本的试剂需用RNase-free水配造。

  低温性:所取样本离体后,如有离散方法正在4℃或冰前举行,离散好的样本立时置于液氮中速冻15 min以上,-80℃生存,干冰运输,以避免RNA的降解。

  1) 若发展的实践项目为miRNA的合联实践,请确认采用的总RNA的提取手腕保存了幼RNA(席卷miRNA)。

  2) 避免紫表和一再冻融,弗成存放于高温状况和绝顶pH溶液中(pH6或pH9)。

  1、烧杯中倒入50 mL DEPC水(每剖解一个生物学样本换一次DEPC水)。

  2、从动物活体取材得回构造后,敏捷用预冷的RNase free水漂洗,以去除血渍和污物,并剔除结缔构造和毛发等非推敲构造(构造样品解决及切割进程正在冰上疾速举行;样本离体后,倡导正在3 min内实现构造取样及液氮速冻,时候过长会导致样本的RNA降解)。

  3、将收集到的构造疾速放入含有预冷的RNase-free水的带螺旋帽的1.5 mL或2.0 mL EP管/冻存管中,立时液氮速冻15 min以上,随后-80℃生存,足量干冰寄送。

  1) 剖解活体特定构造样本时红龙扑克poker,正在含有DEPC水的烧杯中涮明净表表血液(行动疾速,需求正在几秒内实现)。

  2) 实践前,将扫数效到的烧杯内轮廓面、锡箔纸表表、镊子、剖解剪和刀片分歧用无水乙醇和无纺布蘸RNAzap擦拭一遍;实践进程中,用RNAzap擦拭。

  3) 关于需求RNAlater(Ambion,AM7020)及相似生存液生存的样本,请厉刻遵照操作证明举行。

  4) 请勿寄送用裂解液生存的构造样本;动物及临床构造禁止应用锡箔纸、自封袋包裹。

  1、采纳稀奇、幼嫩、成长茂盛的构造部位样本,正在活体状况下擦净构造表表尘土和杂质。

  2、取样,疾速放入预冷好的有符号的RNase-free的螺纹冻存管中,或用符号好名称(名称朝表)的锡箔纸包裹好(禁止应用自封袋、一次性PE手套包装样品),液氮速冻15 min,转化到-80℃生存,足量干冰寄送红龙扑克poker。

  植物构造不要应用RNAlater生存,由于植物构造含有细胞壁及次生壁,RNAlater不易分泌入构造内部;也勿用Trizol直接浸泡植物构造。

  2) 参与适量1×PBS(DEPC水装备)洗濯细胞,200g离心5 min,去上清,洗濯2次。

  3) 参与适量的裂解液(TRIzol举荐Ambion),一再奏笑至细胞充散乱解(涡旋波动也可),将裂解液转化至1.5 mL无酶管中,-80℃生存,足量干冰寄送。

  1) 正在显微镜下参观教育的细胞,确认细胞的完美性(瓦解的细胞会开释出RNA酶降解RNA)。

  3) 参与适量的裂解液(TRIzol举荐Ambion),用移液器充足奏笑使细胞充散乱解(细胞与裂解液的混杂物造成清亮不浓厚的液体,且没有细胞团块残留),将裂解液转化至1.5 mL无酶管中,-80℃生存,足量干冰寄送。

  1) 细胞样品务必裂解充足后再寄送,勿将冻存的细胞直接寄送,由于细胞冷冻的进程中冰晶很容易刺破细胞,此时粉碎的细胞会开释内源性RNase,从而降解RNA。

  2) 举行细胞裂解的操作时移液器,假使发觉细胞样品永远粘度很大,证明该细胞样品仍未裂解充足,此时应赓续补加裂解液,以100 μL为梯度举行补加,直到样品十足裂解充足。

  3) 细胞样品勿用胰酶消化,胰酶会消化细胞膜上的膜卵白,导致细胞瓦解,瓦解的细胞会开释RNase导致RNA降解。

  倡导网罗时应用PAXgene管,于18-25℃能够生存3天,2-8℃能够生存5天,-20/-80℃能够生存8年;规定上需求-80℃生存,足量干冰寄送。

  1) 每个样本均取稀奇血液1 mL于含有EDTA的抗凝管(紫色管帽)中,混匀。取血进程务必维系干净。随后,将收集好的全血用移液器以250 μL/管敏捷分装至1.5 mL离心管中,每管参与750 μL TRIzol LS,混匀,液氮速冻15 min,-80℃生存,足量干冰寄送。

  2) 离散血细胞(约10-15 mL的全血)溶于1 mL TRIzol,混匀,液氮速冻15 min,-80℃生存红龙扑克poker,足量干冰寄送。

  将应用抗凝管所得的血浆分装至1.5 mL的离心管中,每管1 mL,-80℃生存,足量干冰寄送。

  将未应用抗凝剂离散所得的血清样天职装至1.5 mL的离心管中,每管1 mL,-80℃生存,足量干冰寄送。

  离散获得PBMC后,参与适量TRIzol裂解液,充散乱解好。随后,-80℃生存(每5 mL全血PBMC后参与1 mL TRIzol,不要正在PBMC后参与任何冻存液)。

  1) 血液务必正在离体两幼时内解决好并参与Trizol LS混匀,两幼时后血液内mRNA起初降解,后续提取能够会不足格。

  2) 血浆、血清正在冰冻状况下应呈淡黄色,或黄色,假使呈血色或淡血色,则为溶血样品,视为不达标,不予提取;室温熔解后,其应为淡黄色,或黄色澄清透后的液体,如有絮状不溶物或污浊状况视为不达标,不予提取。

  1、取1 mL对数期(OD600=0.6-0.8)的稀奇菌悬液于1.5 mL无酶管中10000 rpm 4℃离心2 min,充足去除上清,然后反复几次离心或分多管离心网罗菌体浸淀,浸淀量需抵达1.5 mL离心管的约200 μL处。

  1) 请务必担保菌体教育时无污染,为简单菌种;如菌种原委解决,请通过显微镜确保菌体是否依旧活菌状况。

  2) 务必网罗对数期菌体,并尽能够地吸净教育基,菌体过老或教育基残留会要紧影响后续的提取结果。

  4) 请不要以菌体的方式寄送有毒性、致病性的细菌或者以液体方式(菌液)寄送任何细菌样本红龙扑克poker。

  5) 菌体若原委特别解决,会展现RNA条带相当,请送样时正在订单里周密备注,不然能够会酿成样本的糟蹋。

  2、样品带回实践室后分装至5 mL或更大要积的离心管或冻存管中(稀奇粪便样品称取200 mg置于5 mL离心管中,即餍足单次提取),加2.5 mL Ambion坐褥的RNAlater® Solution,涡旋混匀,每个样品3-5个反复,4°C留宿。

  3、4°C留宿后,液氮速冻3-5 min,-80°C生存,足量干冰寄送。

  1、采纳采样住址,除去泥土表层未认识的雕谢物层,先多点(8-10点)收集泥土表表腐殖质层红龙扑克poker奥维森科技:转录组学测序送样指南,然后用泥土取样器随机多点(8-10点)分歧收集0-10 cm及10-25 cm土层泥土混杂样品。

  3、涡旋或手摇摆匀,使扫数泥土十足润湿,此时Life Gurad Soil Preservation Solution的液面该当高于土样,遵循实质要求-20°C或-80°C生存样品,足量干冰寄送。

  1、样品定名:“样品名称”应避免展现汉字,请采用字母和数字表现,长度担任正在8个字符以内,最好能表示出其生物学属性和取样处境。

  2、样品标识:请勿仅应用标签纸举行样品符号,标签纸经液氮冷冻事后易零落,酿成样品杂乱;能够应用质料较好的油性笔正在样本管上分明地符号好样本名称,同时也写正在标签纸上,贴正在管壁,再用透后胶带围绕一圈,预防零落。

  3、样本包装:液体样品,倡导应用螺旋口的离心管运输,并应用Parafilm密封离心管口。生存时,请将扫数样品管装于一个自封袋或冻存盒中,做好符号,以防样品丧失。

  4、样品寄送:干冰运输时,请选用保温性好的泡沫盒(倡导壁厚2公分以上)举行样品存放,计算8-10 kg粒状或块状干冰(粉末状干冰较易挥发),以供给低温的样品生存境遇。血液类样本从样本网罗到送样,最好不要超出15天红龙扑克poker,其他样本则为3个月。正在拣选与委托疾递公司时,应事先确认估计投递的时候,而且正在运输进程中随时跟踪物品的处境,您正在纪录运单号的同时请务必正在《时间供职样品提交单》填写您的运单号,以便咱们与您沿途追踪样品的运输状况。

  假使您目前有相宜的样本类型,正正在苦恼怎样发展组学方面的推敲,那么迎接筹商咱们奥维森基因哦!返回搜狐,查看更多

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